确诊禽流感病原体病原体感染的生物医学检验方式主要包括分立甲型、检验病原体的多肽、抗体或抗体或三种检验方式的联手采用。从患者化石中分立到甲型，检验到病原体多肽、抗体，血浆中IgM抗体阳转，或适应期血化石IgG抗体inactivated较全身性有4倍或以内增高能确诊甲型病原体感染。Branne血化石IgM或IgG抗体阴性无法确诊甲型病原体感染，Branne化石抗体检验阴性时，仅可医学确诊为疑为或可能将疑似病例，确诊须要全身性和适应期KMH血浆化石。
（一）甲型病原体感染与本机免疫反应
甲型病原体感染后，潜伏期为3～14天，通常4～7天，潜伏期内采集的患者化石尚无法检出甲型或相应的本机免疫反应。发病后，病原体在血浆中存在的时间（病原体血症期）约为7天，病原体NS1抗体在血浆存在的时间略长。发病后4～5天内，可在患者的血浆、血浆、白细胞、脑脊液和尸检组织化石中分立到病原体，病原体多肽及NS1抗体在这个时期的检出率高。患者血浆中抗体水平，因个体免疫状态不同而具有显著差异。若以前没有病原体感染过甲型或其他黄病原体，或接种过黄病原体疫苗（如：乙脑、黄热等），患者首次病原体感染抗体免疫反应呈现为特异性抗体水平缓慢增高，IgM抗体出现最早，随后出现的是IgA和IgG抗体。在发病后3～5天的患者中IgM抗体检出率约为50%，发病后第5天的患者中检出率约为80%，而在发病后第10天患者中，约99%的患者可检出。IgM抗体水平在发病后2周达高峰，然后逐步下降，可保持2～3个月。IgA抗体出现略晚于IgM抗体，可保持约45天。在发病一周后，可在血浆化石中检出较低inactivated的IgG抗体，之后抗体inactivated缓慢增高，可持续存在多月甚至终生。如果患者属于再次病原体感染甲型（甲型病原体感染者以前曾病原体感染过甲型，有时可能将是曾接种其他黄病原体疫苗或病原体感染过其他黄病原体），抗体inactivated可快速增高并可和多种黄病原体产生反应。主要为高水平的IgG抗体，在全身性即可检出，可持续存在10个月以内，甚至终生。IgA抗体也可在全身性化石中检出。再次病原体感染甲型的患者适应期早期的IgM抗体inactivated明显低于首次病原体感染，甚至无法检出，通过计算IgM/IgG抗体比例，能区分首次或再次甲型病原体感染。IgA抗体检验试剂在医学确诊中的应用尚处于评价阶段。
（二）检验方式选择
在发病的早期（发病5天内）一般采用病原体分立、多肽检验或抗体检验等方式进行确诊，当病程进入适应期后（发病5天以后），一般采用血浆学检验病原体特异性抗体的方式进行确诊。
1.病原体分立。经细胞培养分立病原体，须要生物安全二级（BSL-2)生物医学及必要的仪器设备，在化石运输过程中保持低温（冷冻或冷藏）对于病原体分立非常重要。将化石接种于蚊源细胞（C6/36）或哺乳动物细胞（BHK21、Vero）进行分立培养，出现病变以后，用检验抗体或多肽的方式鉴定病原体。分立到甲型能确诊，但其耗时长，须要数天，不适于快速确诊。
2.多肽检验。多种逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方式可用于甲型多肽检验，主要包括一步法RT-PCR、实时荧光RT-PCR或套式RT-PCR等方式等。多肽检验可在1～2天内鉴别病原体RNA。在患者化石中检出病原体多肽，可确诊且能分型，可用于早期确诊，但多肽检验容易因污染而产生假阴性，因此要求严格分区操作。阴性结果无法排除禽流感确诊，需采集第二份化石（发病5天后）开展血浆学检验，进行确诊。
3.抗体检验。NS1抗体检验可采用ELISA方式或快速检验试剂，可在几十分钟到数小时完成检验，适于现场采用，是禽流感全身性确诊的重要手段，在发病后1天即可检出，也有报道在发病后18天仍可在血化石中检出。目前该方式尚无法分型。由于NS1抗体检验方式的特异性，也可用于黄病原体病原体感染的鉴别确诊。基于我国禽流感流行的特点，国家卫生计生委颁发的《禽流感诊疗指南（2014年第2版）》将化石中检出NS1抗体作为确诊病原体病原体感染依据，可用于早期确诊。阴性结果无法排除禽流感确诊，需采集第二份化石（发病5天后）开展血浆学检验，进行确诊。
4. IgM抗体检验。用于IgM抗体检验的捕获法ELISA（MAC-ELISA）是最常用的检验方式，也有多种商业化快检试剂可用于IgM抗体检验，均无法用于血浆分型检验。目前检验试剂主要是检验病原体包膜蛋白特异性抗体，主要缺陷为与其他黄病原体存在交叉反应。化石中IgM抗体阴性，提示患者可能将新近病原体感染甲型，适用于禽流感早期确诊，但Branne化石无法确诊。一些甲型再次病原体感染者，血化石中IgM抗体inactivated底，甚至无法检出，影响IgM抗体确诊精确性。
5. IgG抗体检验。可采用ELISA、免疫荧光（IFA）、免疫层析等方式检验。甲型IgG抗体与其他黄病原体有交叉反应。IgG抗体检验能用来鉴定首次病原体感染和再次病原体感染，如果全身性化石IgG抗体阴性，适应期阳转，则可确定为首次病原体感染；如果患者适应期血化石IgG抗体inactivated较全身性(两份化石间隔应不少于7天）呈4倍及以内增高可认为是再次病原体感染。采集第二份化石进行确诊对于禽流感防控具有重要意义，尤其是非流行区。
6.中和抗体检验。空斑减少中和实验（Plaque Reduction and Neutralization Test，PRNT）和微量中和实验可用来检验血浆中的中和抗体，是最特异的血浆学检验方式，能分型。须要生物安全二级（BSL-2)生物医学及必要的仪器设备，耗时长，须要数天，不适于快速确诊。患者适应期血浆中和抗体阳转或inactivated较全身性呈4倍及以内增高能确诊。
